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CTAB 法提取DNA的原理和步驟?

生物 2021-11-23 18:29 已查看[]次

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(1)取材料,加液氮研磨成粉末狀,迅速移入1.5 ml Eppendorf管中;

(2)加入800 μl的CTAB提取緩沖液,混勻(CTAB在65℃水浴預(yù)熱),每5min輕輕震蕩幾次,20min后12000 r/min,離心15 min;

(3)小心吸取上清液,加入等體積的酚:氯仿(各400μl)溶液,混勻,4℃,12000 r/min,離心10 min;

(4)小心吸取上清液,加入等體積的氯仿,混勻,4℃,12000 r/min,離心10 min;

(5)重復(fù)步驟(4)1-2次,以蛋白層不出現(xiàn)為止;

(6)取上清,-20℃沉淀1h,4℃,12000 r/min,離心10 min;

(7)棄去上清液,用70%乙醇洗滌沉淀2次;

(8)室溫下干燥后(一般干燥5-15 min),溶于30-50 μl DEPC去離子水中,于-20℃或者-70℃下保存?zhèn)溆谩?/p>

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